1. 檢測原理

本試劑盒采用**雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（Sandwich ELISA）**定量檢測人血清、血漿或尿液中的胱抑素C（Cystatin C）濃度。

• 包被抗體：微孔板預包被抗人Cystatin C單克隆抗體。

• 捕獲與檢測：

  • 樣本中的Cystatin C與包被抗體結合。

  • 加入生物素標記的檢測抗體，形成“抗體-抗原-抗體”復合物。

  • 加入鏈霉親和素-HRP（Streptavidin-HRP）結合生物素。

• 顯色反應：加入TMB底物后，HRP催化顯色（藍色），終止后變為黃色，在450 nm處測定吸光度（OD值），OD值與Cystatin C濃度成正比。

2. 適用范圍

• 樣本類型：人血清、血漿（EDTA/肝素抗凝）、尿液（需離心去除沉淀）。

• 應用領域：

  • 腎功能評估：Cystatin C是腎小球濾過率（eGFR）的敏感標志物。

  • 心血管疾病風險預測：與動脈粥樣硬化、心衰相關。

  • 科研：腎臟疾病、衰老或藥物毒性研究。

3. 試劑盒組成

4. 樣本采集與處理

• 血清/血漿：靜脈采血后離心（3000 rpm，10 min），避免溶血或脂血。

• 尿液：晨尿或隨機尿，離心（2000 rpm，5 min）后取上清。

• 儲存：

  • 短期（≤7天）：2-8°C。

  • 長期：-20°C凍存（避免反復凍融）。

5. 實驗步驟

1. 試劑準備：

   • 洗滌液：1×PBS-T（1:20稀釋濃縮液）。

   • 標準品/樣本恢復至室溫（20-25°C）。

2. 加樣與孵育：

   • 每孔加入100 μL標準品/樣本，37°C孵育90分鐘。

   • 洗滌3次。

   • 加入100 μL生物素檢測抗體，37°C孵育60分鐘。

   • 洗滌3次。

   • 加入100 μL SA-HRP，37°C孵育30分鐘。

   • 洗滌5次。

3. 顯色與終止：

   • 加入100 μL TMB底物，避光室溫反應15分鐘。

   • 加入50 μL終止液，立即測定450 nm OD值。

6. 數據分析

1. 標準曲線：

   • 以標準品濃度（ng/mL）為橫坐標，OD???為縱坐標，擬合4參數邏輯曲線（4PL）。

2. 樣本計算：

   • 根據曲線方程計算濃度，尿液樣本建議用肌酐校正（μg/g Cr）。

7. 注意事項

• 避免污染：更換吸頭，避免交叉污染。

• 干擾因素：

  • 高血脂或溶血樣本需預處理。

  • 類風濕因子（RF）可能引起假陽性。

• 質量控制：

  • 每板需包含空白孔、標準曲線和質控品。

  • 復孔CV應＜10%。

8. 參考范圍

9. 儲存與穩定性

• 未開封試劑盒：2-8°C保存，有效期12個月。

• 開封后：

  • 微孔板：密封后2-8°C保存，1個月內使用。

  • 標準品：-20°C分裝保存。

10. 局限性

• 不與動物Cystatin C交叉反應：僅檢測人源樣本。

• 高濃度樣本：需稀釋后復測。

• 對比方法：結果可能與免疫比濁法或質譜法存在差異。

注：具體操作請以實際試劑盒說明書為準。